El analizador de coagulación es un dispositivo médico de prueba de rutina que mide clínicamente el contenido de varios componentes en la sangre humana, cuantifica los resultados de los análisis bioquímicos y proporciona una base digital confiable para el diagnóstico clínico de diversas enfermedades en los pacientes.
1. Principio de funcionamiento
Los diferentes tipos de coagulómetros utilizan diferentes principios. Actualmente, los principales métodos de detección utilizados son: método de coagulación, método cromogénico de sustrato, método inmunológico, método de aglutinación de látex, etc.
1. Método de coagulación (método biofísico)
El método de coagulación detecta cambios en una serie de cantidades físicas (luz, electricidad, movimiento mecánico, etc.) en el plasma bajo la acción de activadores de la coagulación, y luego analiza los datos obtenidos por una computadora y los convierte en el resultado final, por lo que También se le puede llamar Física biológica.
1.1, método actual.
El método actual utiliza las características de que el fibrinógeno es no conductor y la fibrina es conductora. La muestra a analizar se utiliza como parte del circuito y la formación de fibrina se juzga en función de los cambios en la corriente del circuito durante el proceso de coagulación. Sin embargo, debido a la falta de fiabilidad y la unicidad del método actual, fue rápidamente eliminado por el método óptico, más sensible y escalable.
1.2, Método óptico (método turbidimétrico).
El coagulómetro óptico mide la función de la coagulación basándose en los cambios de turbidez durante el proceso de coagulación. El punto final de detección se determina en función del cambio de luz durante el proceso de coagulación de la muestra a analizar. Cuando se agrega un activador de la coagulación a la muestra, la intensidad de la luz de la muestra aumenta gradualmente a medida que se forma el coágulo de fibrina en la muestra. El instrumento representa este cambio óptico como una curva de coagulación. Cuando la muestra está completamente coagulada, la intensidad de la luz disminuye. Cambia de nuevo. Las ventajas de la prueba de coagulación óptica son la alta sensibilidad, la estructura simple del instrumento y la fácil automatización; la desventaja es que las anomalías ópticas de la muestra, la suavidad de la copa de prueba y las burbujas en la adición de la muestra se convertirán en factores de interferencia en la medición.
1.3, método de cuentas magnéticas.
En el primer método de perlas magnéticas, se colocaba una perla magnética en la copa de detección y se conectaba estrechamente a una varilla de metal ferromagnético fuera de la copa en línea recta. Después de que la muestra se solidificara, la formación de fibrina causaba que la perla magnética se solidificara. desplazarse y desviarse de la varilla de metal, el instrumento detecta el punto final de la coagulación. Este tipo de instrumento también puede denominarse método de perlas magnéticas planas. El primer método de perlas magnéticas planas puede superar eficazmente el problema de la interferencia de fondo de la muestra en los métodos ópticos, pero tiene deficiencias como la baja sensibilidad. El método moderno de perlas magnéticas apareció a finales de los años 1980 y entró en comercialización a principios de los años 1990. El método moderno de perlas magnéticas se denomina método de perlas de circuito magnético dual. El principio de prueba del método de perlas magnéticas de doble circuito magnético es el siguiente: hay un conjunto de bobinas impulsoras en ambos lados de la copa de prueba, que generan un campo electromagnético alterno constante, de modo que las pequeñas bolas de acero desmagnetizadas especiales en la copa de prueba mantener un movimiento de oscilación de amplitud constante. Después de agregar el activador de la coagulación, a medida que aumenta la producción de fibrina, aumenta la viscosidad del plasma y la amplitud del movimiento de la pequeña bola de acero se debilita gradualmente. El instrumento detecta el cambio en el movimiento de la pequeña bola de acero basándose en otro conjunto. de las bobinas de medición Cuando la amplitud del movimiento se atenúa a 50 Determine el punto final de la coagulación en %.
2. Método cromogénico del sustrato (método bioquímico)
El método cromogénico del sustrato se utiliza para estimar el contenido y la actividad de la sustancia medida midiendo el cambio de absorbancia del sustrato cromogénico. Este método también puede denominarse método bioquímico. El principio es sintetizar artificialmente un pequeño péptido que tiene una secuencia de aminoácidos similar a la de los factores de coagulación naturales y contiene un sitio de acción específico, y conecta un gen químico hidrolizable que produce color al aminoácido en el sitio de acción. Durante la medición, debido a que el factor de coagulación tiene actividad enzimática proteolítica, no solo puede actuar sobre la cadena peptídica de la proteína natural, sino también sobre el sustrato de la cadena peptídica sintética, liberando así el gen cromogénico y dando color a la solución. La profundidad del color producido es proporcional a la actividad de los factores de coagulación, por lo que se puede realizar una cuantificación precisa. Actualmente existen decenas de sustratos peptídicos sintéticos, y el más utilizado es la p-nitroanilina (PNA), que es de color amarillo y se puede medir a una longitud de onda de 405 mm.
3. Métodos inmunológicos
En el método inmunológico, la sustancia problema purificada se utiliza como antígeno, se prepara el anticuerpo correspondiente y luego se utiliza la reacción antígeno-anticuerpo para realizar la determinación cualitativa y cuantitativa de la sustancia problema.
Los métodos comúnmente utilizados son:
3.1, Método de inmunodifusión.
La sustancia problema se combina con el anticuerpo correspondiente en un medio determinado, se mide el tamaño del anillo de precipitación, se compara con el estándar y se calcula la concentración de la sustancia problema. Este método es sencillo de utilizar y no requiere equipo especial, pero lleva demasiado tiempo y no es muy sensible. Sólo es adecuado para la detección de niveles más altos de factores de coagulación.
3.2, electroforesis de flechas.
En un determinado campo eléctrico, la sustancia de prueba en el soporte de gel se combina con su anticuerpo correspondiente para formar "picos de cohete". La altura del pico de cohete es proporcional a su contenido. La determinación cuantitativa se lleva a cabo midiendo la altura del pico y comparándola. con la norma. Este método es complejo de operar y tiene pocas aplicaciones clínicas.
3.3, inmunoelectroforesis bidimensional.
Ciertos factores de coagulación con estructuras moleculares anormales pueden separarse mediante electroforesis tanto en dirección horizontal como vertical.
3.4. Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA).
Se utiliza un antígeno o anticuerpo marcado con una enzima para realizar una reacción de unión al antígeno con el objeto de prueba. Después del lavado, el antígeno o anticuerpo no unido y las sustancias que interfieren en la muestra se eliminan, dejando el complejo antígeno-anticuerpo fijado en la pared del tubo. Luego, el sustrato enzimático y las sustancias cromogénicas reaccionan para producir sustancias coloreadas, que se miden con un lector de microplacas. La profundidad del color es proporcional a la concentración de la sustancia que se está analizando. Este método tiene alta sensibilidad y especificidad y se ha utilizado en la detección de muchos componentes de hemostasia y trombosis.
3.5, método inmunoturbidimétrico.
La sustancia de prueba y su anticuerpo correspondiente se mezclan para formar un complejo, produciendo así partículas precipitadas suficientemente grandes para la medición mediante turbidimetría de transmisión o turbidimetría de dispersión. Este método es simple de operar, tiene buena precisión y es fácil de automatizar.
2. Historia del desarrollo
En 1910, Kottman inventó el coagulómetro más antiguo del mundo, que medía el cambio de viscosidad durante la coagulación de la sangre para reflejar el tiempo de coagulación del plasma.
En 1922, Kugelmass utilizó un turbidímetro para medir los cambios en la luz transmitida y reflejar el tiempo de coagulación del plasma.
En 1950, Schnitger y Gross inventaron un coagulómetro basado en el método galvánico.
En la década de 1960, se desarrollaron instrumentos mecánicos de coagulación y apareció el primer método de perlas magnéticas planas.
Después de la década de 1970, debido al desarrollo de la industria de la maquinaria y la electrónica, surgieron varios tipos de medidores de coagulación totalmente automáticos.
En la década de 1980, debido a la aparición de sustratos cromogénicos y su aplicación en la detección de la coagulación sanguínea, el instrumento de coagulación totalmente automático no sólo puede realizar pruebas de detección generales, sino también detectar factores individuales de los sistemas de coagulación, anticoagulación y fibrinolíticos, lo que hace que Es posible la detección de anticoagulación y fibrinólisis.
A finales de la década de 1980, la invención del método de perlas magnéticas de circuito magnético dual aportó nuevos conceptos a la detección de trombos y la hemostasia. Debido a su principio de diseño único, algunos de los factores que influyen en la detección óptica ya no existen en este tipo de instrumento de detección. .
En la década de 1990, el desarrollo del canal inmunológico del coagulómetro totalmente automático integró varios métodos de detección, y los elementos de detección fueron más completos, proporcionando un nuevo medio para la detección de trombos y hemostasia.
Tres, clasificación
Según el grado de automatización, los medidores de coagulación se pueden dividir en instrumentos totalmente automáticos y semiautomáticos.
1. Completamente automático:
Las características de los instrumentos totalmente automáticos son una rápida velocidad de detección, muchos elementos de medición, principios de detección complejos y un diseño inteligente de los instrumentos. Cuando se utiliza un coagulómetro completamente automático, solo necesita colocar la muestra de plasma separada en una ubicación designada y el instrumento puede completar todo el proceso de adición de muestras, precalentamiento, detección e impresión de informes. La mayoría de los medidores de coagulación completamente automáticos pueden seleccionar arbitrariamente diferentes combinaciones de elementos para la prueba. La detección de muestras es aleatoria y las funciones de almacenamiento y procesamiento de datos del instrumento también son sólidas.
2. Semiautomático:
Los coagulómetros semiautomáticos requieren la adición manual de muestras, su detección es lenta, tienen un principio único, pocos elementos de detección y están equipados con funciones de software limitadas.
4. Indicadores de detección
Los indicadores básicos de detección de trombo y hemostasia son: tiempo de protrombina (PT), tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA), fibrinógeno (FIB), tiempo de trombina (TT), factores de coagulación endógenos, factores de coagulación exógenos, heparina de alto peso molecular, heparina de bajo peso molecular. peso heparina, proteína C, proteína S, etc.
5. Cosas a tener en cuenta
1. Después de comprar un instrumento, debe evaluarlo de acuerdo con los parámetros de rendimiento que el instrumento debería poder alcanzar como se indica en el manual de instrucciones, y comunicarse con el fabricante de manera oportuna si encuentra algún problema.
2. El inyector de muestra utilizado durante el proceso de detección debe calibrarse para garantizar la precisión de la dilución del reactivo y el volumen de la muestra.
3. Para los elementos de prueba con plasma calibrado, se debe usar el plasma calibrado para establecer una curva estándar. Al cambiar el número o tipo de lote de reactivo, se debe usar el plasma calibrado para restablecer la curva estándar.
4. Al probar muestras, se debe realizar un control de calidad interior y las pruebas con instrumentos semiautomáticos se deben realizar por duplicado.
5. Es muy importante realizar un control de calidad antes del análisis. La recolección y el almacenamiento de las muestras deben realizarse estrictamente de acuerdo con los requisitos pertinentes.
6. El tiempo de colocación de los reactivos en el tanque de precalentamiento debe limitarse estrictamente de acuerdo con los requisitos de las instrucciones de los reactivos. Un tiempo de colocación prolongado afectará la precisión de los resultados de la medición.