L'analyseur de coagulation est un dispositif médical de test de routine qui mesure cliniquement le contenu de divers composants du sang humain, quantifie les résultats d'analyse biochimique et fournit une base numérique fiable pour le diagnostic clinique de diverses maladies chez les patients.
1. Principe de fonctionnement
Différents types de coagulomètres utilisent des principes différents. Actuellement, les principales méthodes de détection utilisées sont : la méthode de coagulation, la méthode chromogénique sur substrat, la méthode immunologique, la méthode d'agglutination au latex, etc.
1. Méthode de coagulation (méthode biophysique)
La méthode de coagulation détecte les changements dans une série de grandeurs physiques (lumière, électricité, mouvement mécanique, etc.) dans le plasma sous l'action d'activateurs de coagulation, puis analyse les données obtenues par un ordinateur et les convertit en résultat final. peut également être appelée physique biologique.
1.1, méthode actuelle.
La méthode actuelle utilise les caractéristiques selon lesquelles le fibrinogène est non conducteur et la fibrine est conductrice. L'échantillon à tester est utilisé comme partie du circuit, et la formation de fibrine est jugée sur la base des modifications du courant du circuit au cours du processus de coagulation. Cependant, en raison du manque de fiabilité et du caractère unique de la méthode actuelle, elle a été rapidement éliminée par la méthode optique, plus sensible et plus évolutive.
1.2, Méthode optique (méthode turbidimétrique).
Le coagulomètre optique mesure la fonction de coagulation en fonction des changements de turbidité au cours du processus de coagulation. Le point final de détection est déterminé en fonction du changement de lumière au cours du processus de coagulation de l’échantillon à tester. Lorsqu'un activateur de coagulation est ajouté à l'échantillon, l'intensité lumineuse de l'échantillon augmente progressivement à mesure que le caillot de fibrine se forme dans l'échantillon. L'instrument représente ce changement optique sous la forme d'une courbe de coagulation. Lorsque l'échantillon est complètement coagulé, l'intensité lumineuse diminue. Changez encore. Les avantages des tests de coagulation optique sont une sensibilité élevée, une structure d'instrument simple et une automatisation facile ; l'inconvénient est que les anomalies optiques de l'échantillon, la douceur de la coupelle de test et les bulles dans l'ajout de l'échantillon deviendront toutes des facteurs d'interférence dans la mesure.
1.3, méthode des billes magnétiques.
Dans la première méthode des billes magnétiques, une bille magnétique était placée dans la coupelle de détection et elle était étroitement reliée à une tige métallique ferromagnétique à l'extérieur de la coupelle en ligne droite. Une fois l'échantillon solidifié, la formation de fibrine provoquait la formation de la bille magnétique. décaler et s'écarter de la tige, l'instrument détecte le point final de la coagulation sur cette base. Ce type d'instrument peut également être appelé méthode des billes magnétiques planaires. La première méthode de billes magnétiques planaires peut surmonter efficacement le problème de l’interférence de fond de l’échantillon dans les méthodes optiques, mais elle présente des inconvénients tels qu’une faible sensibilité. La méthode moderne des billes magnétiques est apparue à la fin des années 1980 et est entrée sur le marché au début des années 1990. La méthode moderne des billes magnétiques est appelée méthode des billes à double circuit magnétique. Le principe de test de la méthode des billes magnétiques à double circuit magnétique est le suivant : il y a un ensemble de bobines d'entraînement des deux côtés de la coupelle d'essai, qui génèrent un champ électromagnétique alternatif constant, de sorte que les petites billes d'acier démagnétisées spéciales dans la coupelle d'essai maintenir un mouvement d'oscillation d'amplitude constante. Une fois l'activateur de coagulation ajouté, à mesure que la production de fibrine augmente, la viscosité du plasma augmente et l'amplitude du mouvement de la petite bille d'acier s'affaiblit progressivement. L'instrument détecte le changement dans le mouvement de la petite bille d'acier sur la base d'un autre ensemble. des bobines de mesure Lorsque l'amplitude du mouvement s'atténue jusqu'à 50 Déterminer le point final de la coagulation à %.
2. Méthode chromogénique sur substrat (méthode biochimique)
La méthode chromogénique du substrat est utilisée pour estimer la teneur et l'activité de la substance mesurée en mesurant le changement d'absorbance du substrat chromogénique. Cette méthode peut également être appelée méthode biochimique. Le principe est de synthétiser artificiellement un petit peptide qui possède une séquence d'acides aminés similaire à celle des facteurs naturels de coagulation et contient un site d'action spécifique, et relie un gène chimique hydrolysable producteur de couleur à l'acide aminé au niveau du site d'action. Pendant la mesure, le facteur de coagulation ayant une activité enzymatique protéolytique, il peut non seulement agir sur la chaîne peptidique protéique naturelle, mais également sur le substrat de la chaîne peptidique synthétique, libérant ainsi le gène chromogène et colorant la solution. La profondeur de la couleur produite est proportionnelle à l’activité des facteurs de coagulation, ce qui permet une quantification précise. Il existe actuellement des dizaines de substrats peptidiques synthétiques, le plus couramment utilisé étant la p-nitroaniline (PNA), qui est jaune et peut être mesurée à une longueur d'onde de 405 mm.
3. Méthodes immunologiques
Dans la méthode immunologique, la substance d'essai purifiée est utilisée comme antigène, l'anticorps correspondant est préparé, puis la réaction antigène-anticorps est utilisée pour effectuer une détermination qualitative et quantitative de la substance d'essai.
Les méthodes couramment utilisées sont :
3.1, Méthode d'immunodiffusion.
La substance d'essai est combinée avec l'anticorps correspondant dans un certain milieu, la taille de l'anneau de précipitation est mesurée par rapport à la norme et la concentration de la substance d'essai est calculée. Cette méthode est simple à mettre en œuvre et ne nécessite pas d'équipement spécial, mais elle est trop longue et peu sensible. Elle ne convient que pour la détection de niveaux plus élevés de facteurs de coagulation.
3.2, électrophorèse en flèche.
Dans un certain champ électrique, la substance d'essai dans le support de gel se combine avec son anticorps correspondant pour former des « pics de fusée ». La hauteur du pic de fusée est proportionnelle à son contenu. La détermination quantitative est effectuée en mesurant la hauteur du pic et en la comparant. avec la norme. Cette méthode est complexe à mettre en œuvre et a peu d’applications cliniques.
3.3, immunoélectrophorèse bidimensionnelle.
Certains facteurs de coagulation présentant des structures moléculaires anormales peuvent être séparés par électrophorèse dans les directions horizontale et verticale.
3.4. Test immuno-enzymatique (ELISA).
Un antigène ou un anticorps marqué par une enzyme est utilisé pour effectuer une réaction de liaison à l'antigène avec l'objet à tester. Après le lavage, l'antigène ou l'anticorps non lié et les substances interférentes présentes dans l'échantillon sont éliminés, laissant le complexe antigène-anticorps fixé sur la paroi du tube. Ensuite, le substrat enzymatique et les substances chromogènes réagissent pour produire des substances colorées, qui sont mesurées avec un lecteur de microplaques. La profondeur de couleur est proportionnelle à la concentration de la substance testée. Cette méthode a une sensibilité et une spécificité élevées et a été utilisée dans la détection de nombreux composants de l'hémostase et de la thrombose.
3.5, méthode immunoturbidimétrique.
La substance d'essai et son anticorps correspondant sont mélangés pour former un complexe, produisant ainsi des particules précipitées suffisamment grosses pour être mesurées par turbidimétrie à transmission ou turbidimétrie à diffusion. Cette méthode est simple à utiliser, présente une bonne précision et est facile à automatiser.
2. Historique du développement
En 1910, Kottman a inventé le premier coagulomètre au monde, qui mesurait le changement de viscosité au cours de la coagulation sanguine pour refléter le temps de coagulation du plasma.
En 1922, Kugelmass a utilisé un turbidimètre pour mesurer les changements dans la lumière transmise afin de refléter le temps de coagulation du plasma.
En 1950, Schnitger et Gross inventent un coagulomètre basé sur la méthode galvanique.
Dans les années 1960, des instruments de coagulation mécanique ont été développés et la première méthode de billes magnétiques planaires est apparue.
Après les années 1970, en raison du développement de l’industrie des machines et de l’électronique, différents types de coagulateurs entièrement automatiques ont vu le jour.
Dans les années 1980, en raison de l'émergence de substrats chromogènes et de leur application dans la détection de la coagulation sanguine, l'instrument de coagulation entièrement automatique peut non seulement effectuer des tests de dépistage généraux, mais également détecter des facteurs individuels des systèmes de coagulation, d'anticoagulation et fibrinolytique, ce qui rend il est possible de La détection de l'anticoagulation et de la fibrinolyse est possible.
À la fin des années 1980, l’invention de la méthode des billes magnétiques à double circuit magnétique a apporté de nouveaux concepts à la détection du thrombus et de l’hémostase. En raison de son principe de conception unique, certains des facteurs d’influence de la détection optique n’existent plus sur ce type d’instrument de détection. .
Dans les années 1990, le développement du canal immunitaire du coagulomètre entièrement automatique a intégré diverses méthodes de détection, et les éléments de détection étaient plus complets, offrant ainsi un nouveau moyen de détection du thrombus et de l'hémostase.
Trois, classement
Selon le degré d'automatisation, les coagulateurs peuvent être divisés en instruments entièrement automatiques et semi-automatiques.
1. Entièrement automatique :
Les caractéristiques des instruments entièrement automatiques sont une vitesse de détection rapide, de nombreux éléments de mesure, des principes de détection complexes et une conception intelligente des instruments. Lorsque vous utilisez un coagulomètre entièrement automatique, il vous suffit de placer l'échantillon de plasma séparé à un emplacement désigné, et l'instrument peut terminer l'ensemble du processus d'ajout d'échantillon, de préchauffage, de détection et d'impression du rapport. La plupart des coagulateurs entièrement automatiques peuvent sélectionner arbitrairement différentes combinaisons d'éléments à tester. La détection des échantillons est aléatoire et les fonctions de traitement et de stockage des données de l'instrument sont également puissantes.
2. Semi-automatique :
Les coagulomètres semi-automatiques nécessitent un ajout manuel d'échantillons, sont lents à détecter, ont un principe unique, ont peu d'éléments de détection et sont équipés de fonctions logicielles limitées.
4. Indicateurs de détection
Les indicateurs de base de détection du thrombus et de l'hémostase sont : le temps de prothrombine (PT), le temps de céphaline activée (APTT), le fibrinogène (FIB), le temps de thrombine (TT), les facteurs de coagulation endogènes, les facteurs de coagulation exogènes, l'héparine de haut poids moléculaire, l'héparine de bas poids moléculaire. poids d'héparine, de protéine C, de protéine S, etc.
5. Choses à noter
1. Après avoir acheté un instrument, vous devez évaluer l'instrument en fonction des paramètres de performance que l'instrument devrait être capable d'atteindre, comme indiqué dans le manuel d'instructions, et contacter le fabricant en temps opportun si des problèmes sont détectés.
2. L'injecteur d'échantillon utilisé pendant le processus de détection doit être calibré pour garantir l'exactitude de la dilution du réactif et du volume de l'échantillon.
3. Pour les éléments de test avec du plasma calibré, le plasma calibré doit être utilisé pour établir une courbe standard. Lors du changement du numéro de lot ou du type de réactif, le plasma calibré doit être utilisé pour rétablir la courbe standard.
4. Lors des tests d'échantillons, un contrôle de qualité en intérieur doit être effectué et les tests avec des instruments semi-automatiques doivent être effectués en double.
5. Il est très important d'effectuer un contrôle de qualité avant l'analyse. La collecte et le stockage des échantillons doivent être effectués en stricte conformité avec les exigences en vigueur.
6. Le temps de placement des réactifs dans le réservoir de préchauffage doit être strictement limité conformément aux exigences des instructions des réactifs. Un temps de placement prolongé affectera la précision des résultats de mesure.
